微生物實驗前端我們用微生物限度檢查儀提取樣品,后面我們需要把提取樣品的濾膜貼到事前準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基上,菌面朝上,平貼,不得有氣泡。相應(yīng)的液體培養(yǎng)基注入濾杯內(nèi),培養(yǎng)基掩蓋濾膜表面即可。培養(yǎng)基直接關(guān)系到微生物的實驗結(jié)果是否成功。在培養(yǎng)基當(dāng)中我們的ph值又是重要的影響因素。微生物對生長對于ph環(huán)境要求很高。合適的ph環(huán)境下微生物才能正常生長。在實驗前我們一般都會對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理,滅菌會對培養(yǎng)基的PH值產(chǎn)生重大的變化。今天我們來分析下引起PH值變化有哪些因素。
1、滅菌的時間和溫度
在高壓濕熱滅菌時,長時間的高溫會對培養(yǎng)基產(chǎn)生很多不利的影響,例如會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)分解、營養(yǎng)成分改變以及pH值變化,進(jìn)而影響微生物生長。同時還可能引起培養(yǎng)基顏色變化、透明度降低、瓊脂凝膠強(qiáng)度變化等。培養(yǎng)基在滅菌過程中,滅菌的溫度和時間,高壓滅菌器升溫、降溫的速率,滅菌容器的容積和裝載方式等因素都對培養(yǎng)基的滅菌有著重要影響。
2、培養(yǎng)基的成分
在培養(yǎng)基的配制過程中我們會發(fā)現(xiàn),同樣的滅菌溫度和時間,同樣的體積和裝量的不同培養(yǎng)基,在滅菌后pH值變化不同,有的培養(yǎng)基pH值變化較多,有的培養(yǎng)基pH值變化較少。這是因為不同培養(yǎng)基的成分不盡相同,而不同的成分在滅菌過程中對培養(yǎng)基ph值有著不同的影響。糖類和蛋白胨是培養(yǎng)基中最常見的兩種重要成分,那么這兩種成分分別對培養(yǎng)基滅菌后pH值有著什么樣的影響呢?
糖類,例如葡萄糖、乳糖等作為碳源被微生物所利用。糖類在高溫條件下會產(chǎn)生有機(jī)酸使培養(yǎng)基pH值下降。一般情況下,培養(yǎng)基含糖量越高,滅菌后pH值下降越多。如果過度滅菌pH值變化會更加明顯。同時,糖類在高溫滅菌時容易焦化,使培養(yǎng)基顏色加深。
蛋白胨一般作為培養(yǎng)基氮源,為微生物的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)。蛋白胨在培養(yǎng)基滅菌時還能對培養(yǎng)基的pH值變化起到一定的緩沖作用。一般含胨量高的培養(yǎng)基,滅菌前后pH值變化相對較小。
另外,若培養(yǎng)基成分中含有緩沖劑,如磷酸氫二鉀等,也可以減少培養(yǎng)基滅菌前后pH值的變化。
3、測量pH值時的溫度
同一培養(yǎng)基在不同溫度下測得的pH值也會有一定差異,一般培養(yǎng)基的pH值會隨著測量時溫度的升高而降低。培養(yǎng)基滅菌之后未完全冷卻時,測量的pH值一般會偏低,這是由于溫度升高時溶液中的游離離子數(shù)增多,測得的pH值較低;反之,當(dāng)溫度降低時游離離子數(shù)減少,測得的pH值較高。通常我們在測定培養(yǎng)基pH值時,溫度控制在25℃左右。
以上就是微生物中培養(yǎng)基PH值引起變化的重要原因,知道這些因素我們在合理的操作控制PH值能更好的的到微生物實驗想要的結(jié)果!