總大腸菌群濾膜法membrane filter technique for total coliforms ，總大腸菌群用微生物限度薄膜過(guò)濾檢測(cè)儀如何檢測(cè)

　　總大腸菌群濾膜法是指用孔徑為0.45pm的微孔濾膜過(guò)濾水樣,將濾膜貼在添加乳糖的選撣性培養(yǎng)基上37C培養(yǎng)24h,能形成特征性菌落的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌以檢測(cè)水中總大腸菌群的方法。

　　檢驗(yàn)步驟

　　1、準(zhǔn)備工作

　　濾膜滅菌:將濾膜放入燒杯中,加入蒸餾水,置于佛水浴中煮佛滅菌3次,每次15 min。前兩次煮沸后需更換水洗滌2次~3次,以除去殘留溶劑。濾器滅菌;用點(diǎn)燃的酒精棉球火焰滅菌。也可用蒸汽滅菌器103. 43 kPa (121C,15 Ib)高壓滅菌20 min.

　　2、過(guò)濾水樣

　　用無(wú)菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上.固定好濾器,將100 ml水樣(如水樣含菌數(shù)較多，可踐少過(guò)濾水樣量，或?qū)⑺畼酉♂?注人濾器中,打開(kāi)濾器閥門(mén),在-5.07X10' Pa(負(fù)0.5大氣壓)下抽濾。

　　3、培養(yǎng)

　　水樣濾完后,再抽氣約5s.關(guān)上濾器閥門(mén),取下濾器,用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分.移放在品晶紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上,濾膜截留細(xì)菌面向上,濾膜應(yīng)與培養(yǎng)基完全貼緊,兩者間不得留有氣泡,然后將平皿倒置.放入37C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24 h士2 h.

　　4、結(jié)果觀察與報(bào)告

　　挑取符合 下列特征菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢：

　　紫紅色,具有金屬光澤的菌落:

　　深紅色.不帶或略帶金屬光澤的菌落;

　　淡紅色.中心色較深的菌落。

　　凡革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽胞桿菌.再接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液,于37仁培養(yǎng)24h,有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者,則判定為總大腸菌群陽(yáng)性。

　　按式(1)計(jì)算濾膜 上生長(zhǎng)的總大腸菌群數(shù),以每100 mI.水樣中的總大腸菌群數(shù)(CFU/100 mL)報(bào)告之。